DPO(dual priming oligonucleotide)引物是由CHUN等[9]于2007年*1次提出,乳酸杆菌,其特点在于它包含2个各自独立的特异性引物区域,5′端序列由18~25个碱基组成并与靶基因序列配对,3′端序列由6~12个碱基组成用来引导PCR反应的特异性延伸,这两段独立的特异性区域利用寡聚次(Inosine,I)进行连接,由于比一般碱基的退火温度低,在退火时寡聚次形成类似泡状的结构,从而使5′和3′区域形两个独立功能的双特异性引物结构,而且由于其特殊的结构,乳酸杆菌,引物自身以及引物之间很难形成二级结构且对退火温度不敏感,在一定范围内改变退火温度对检测特异性不产生影响,乳酸杆菌生产厂家,如图1所示。而且理论上5′和3′任何一个区域**过3个碱基不匹配就不能扩增,买乳酸杆菌,运用DPO引物这一特点,已建立了基于DPO引物的SNP的检测方法[9]。目前,DPO引物已经被广泛应用于医学病原菌、食源性微生物等[10-11]。本研究拟运用DPO引物高特异性、不受退火温度影响等特征,结合SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR技术,建立一种特异性强、灵敏度高的植物乳杆菌检测方法。
植物乳杆菌具有很多的保健作用,如下:①有一定的*调节作用;②对致病菌有抑制作用;③降低血胆固醇含量和预防心血管疾病;④维持肠道内菌群平衡;⑤促进营养物质吸收;⑥缓解乳糖不耐症;⑦阻拦坏死细胞的形成等。植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是一种常用于酸奶及发酵乳制品生产的乳酸菌,被列入《可用于食品的菌种名单》(卫办监督发[2010]65号)。